有没有生物医学方面做小白鼠灌流实验的高手?

作者:kylelong  于 2011-10-7 06:02 发表于 最热闹的华人社交网络--贝壳村

作者分类:科普知识|通用分类:请求帮助|已有13评论

 

 

    最近,想做小白鼠灌流实验,自己经验不多,希望高手指点。以下信息来自网络,看看有没有问题。先谢谢了。

 

1,离体心脏灌注实验(langendorff experiment):在摘取麻醉的动物活体心脏之后用固定液灌流心脏。

 

1)需要足够细的主动脉插管,可以购买灌流针,也可以利用200ul的枪头自己烧制,最好能使尖端带有凹槽以利于系线固定(枪头有凹槽),头皮针太滑、太尖。

2)足够快的解剖操作,准确地将主动脉灌流针(或自制插管)插到主动脉(aortaartery)根部,而不刺破主动脉瓣(aortic vaives)。

3)减少插管前心脏的代谢,但是用冰水容易使主动脉回缩。

4)灌流针从左心间插入,一般深度到达左动脉弓(aortic archarterial arcades)为宜,此时隐约能明显看到针尖在动脉弓的位置。

5)为了方便固定,可以用小号止血钳夹住进针的位置,打开灌流器(蠕动泵之类),调节流速(这个值一般靠经验),开始灌注。

 

 

        2,活体灌注固定实验(perfusion-fixed experiment):就是在麻醉的动物活体时通过心脏将4%的多聚甲醛(PFA)固定液灌流到全身。

 

1)小鼠麻醉后,用大头针固定四肢在泡沫板上。灌流器要事先准备好。

2)剪开胸腔暴露心脏,用20ml注射器(尖端用血管钳弄钝,避免刺破心脏或主动脉)从心尖(apex)插入至升主动脉(ascending aorta,发自左心室,位于肺动脉干与上腔静脉之间,向右前上方至右侧第2胸肋关节后方移行为主动脉弓,升主动脉根部发出左、右冠状动脉),用血管钳固定针尖,也可以用镊子固定针头。注意:针头不要扎得太深,进入左心室就可以了,不用非得进入主动脉,太深的话,扎破了室间隔进入肺循环后,肺就很快白了。

3)用生理盐水(normal saline,用于两栖类动物时是0.670.70%,用于哺乳类动物和人体时是0.850.9%,人们平常点滴用的氯化钠注射液浓度是0.9%)或者pbs快速先冲洗,

4)待小鼠快变成“气球小鼠”之前(其实很快,也就打开灌流器之后30秒不到),可以观察灌流器工作阻力明显增加,剪刀剪开右心包(也有剪右心耳的),让灌流液流出。

5)期间会观察到的现象:四肢抽搐,鼠尾先翘起后僵直,肝脏颜色变浅,鼠口鼻中有白色泡沫涌出,肠道颜色稍有变化,但不是很明显。

6)用4%多聚甲醛缓慢冲洗灌注(也可以用注射器,但必须是技术相当熟练)。判断灌注效果好不好的标志是:鼠尾僵直;肝脏变成浅色,有的人直接描述为发白。

6)灌流只是临时固定,以便取较脆弱的组织(如脊髓和脑组织),取出来后的组织放到取材体积20倍的多聚甲醛溶液中固定。

7)决定灌注质量的额外因素:小鼠麻醉剂量要合适,不能让它麻醉过量;剪开胸腔前做好灌注准备,剪开之后立即操作。

8)中心原则:一定要在灌流液进入之前,保证老鼠存活,血液循环畅通。

9)如果要保留完好心脏,则可以绕过左心尖,直接从主动脉弓进针,可以直接将主动脉弓截断,伤口进针,下口止血钳封闭,灌注差不多时,就不用剪开右心包,直接打开下口。

10)注射器灌注,由于压力不好控制,容易导致小血管破裂,片子形态不好。

11)盐水一般3050mlPFA一般50mL左右,在换液时不要移动针头。

 

    3,活体麻醉问题

 

       (11%戊巴比妥钠,80mg/kg效果很好。

       2)腹腔注射(IP)麻醉,药物由腹腔粘膜吸收;如果误打进了肠腔或膀胱就会导致效果不理想。

       3)保证注入腹腔的办法:拇指和食指捏住小鼠头部皮肤,小鼠背靠手掌,将尾巴固定在小指和无名指缝中,此时小鼠牢固被固定在左手中。

       4)看到小鼠的髂骨上缘了吗?1mL的注射器沿髂骨上缘(大概是大腿前沿)水平进针,针尖的开口要向上(向外);水平,是指沿小鼠的左右。进针后稍微摇动针尖,这样即使针尖进入了肠腔,一摇自然就出来了。然后控制好量缓缓注射。

       (52%的戊巴比妥纳效果也很好,剂量45mg/kg体重腹腔注射,约十分钟达到最佳的麻醉状态。

      (6)其它麻醉方法:氯胺酮(8 mg/ 100 g);10%水合氯醛,3ml/kg;用麻醉机吸入麻醉剂(异氟醚)。

 

(收集编辑)

 

 


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发表评论 评论 (13 个评论)

0 回复 fuji 2011-10-7 06:14
你学医的?我看了就分不清东北。
0 回复 白露为霜 2011-10-7 06:15
小白鼠真可怜。
0 回复 柳絮闻雁 2011-10-7 06:23
有视频就好了。
0 回复 ManCreatedGod 2011-10-7 06:26
白露为霜: 小白鼠真可怜。
小白鼠的死真正地为拯救人做出了贡献。并不像耶稣上十字架那种口头的拯救
0 回复 RNSandi 2011-10-7 07:20
  
0 回复 在美一方 2011-10-7 07:25
你是在问问题吗?没看出来啊。2是我实验室的常规,1是多年前做过,都是做大鼠,小鼠更容易。

个人认为这样具体的描述某些细节对圈外人士非常的disturbing,需要交流应该私下进行或者在专业论坛讨论。
0 回复 kylelong 2011-10-7 08:35
在美一方: 你是在问问题吗?没看出来啊。2是我实验室的常规,1是多年前做过,都是做大鼠,小鼠更容易。

个人认为这样具体的描述某些细节对圈外人士非常的disturbing,需要 ...
吸取各方智慧
0 回复 在美一方 2011-10-7 08:46
kylelong: 吸取各方智慧
你们动物中心对这些信息没有规范吗?我们是有的,连照个照片都需要在protocol里面批准的。而这里不少网友想看我实验鼠的照片,碍于规范,我从来没满足过谁的要求。

你说是贴这个文是吸取各方的智慧,而且题目里也有个问号,可我并没有看见你问问题,而是详细描述在外人看来很残酷的技术细节。如果冒犯了,请原谅,我不得不说你这篇文章发在公共场合,不是我理解的professional.

不必回了,我不会继续讨论,尽管你这些步骤里面有些是比较tricky而我是相当有经验的。
0 回复 山之西东 2011-10-7 09:24
你来问这样的问题,是否有点over qualify?
0 回复 水影儿 2011-10-7 10:51
对小白鼠们,我做过的最高难操作是从眼球取血。现在想起来直做噩梦。
0 回复 kylelong 2011-10-7 11:18
水影儿: 对小白鼠们,我做过的最高难操作是从眼球取血。现在想起来直做噩梦。
的确。腿部采血好一些。
0 回复 genhunter 2011-10-21 12:18
Are you going to do whole body perfusion & fixation or just for any particular organ, such as liver?
0 回复 kylelong 2011-10-22 00:46
genhunter: Are you going to do whole body perfusion & fixation or just for any particular organ, such as liver?
liver and brain. Thanks.

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